要完成一項漂亮的ELISA實驗,不光要做足實驗的準(zhǔn)備,還要對其他各種輔助材料有所了解,這其中防腐劑的運用很重要,
ELISA試劑盒中常用的防腐劑有:
1.疊氮鈉是HRP的抑制劑,凡是和HRP接觸的試劑,一定不能用;
2.硫柳汞在ELISA試劑中可普遍使用,但因其有毒,較少使用;
3.市面許多試劑盒產(chǎn)品,用抗生素做防腐劑較多,如慶大。
4.如果試劑僅在實驗室短期使用,其實并不需加防腐劑,常規(guī)試劑放4度冰箱,抗體、酶等加甘油分裝凍存即可。
5.防污染可添加0.02%的疊氮鈉,或0.01%的硫柳汞。疊氮鈉在多數(shù)情況下有用且有效,但在有些實驗中卻不合適,因為它能阻斷細(xì)胞的電子傳遞鏈,對許多生物體都有毒性,因此不能用于活體實驗;因為含有氨基而能干擾許多標(biāo)記方法;不能用于辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體。而硫柳汞不含氨基,不影響基質(zhì)的穩(wěn)定性。如果將抗體應(yīng)用于生物活性檢測、體內(nèi)實驗,一般不使用任何防腐劑,這些實驗用的抗體應(yīng)少量分裝冷存,切忌反復(fù)凍融。
6.吐溫-20是作為穩(wěn)定劑,可減少非特異性黏合。
7.甘油是防止凍融過程中的固-液相變而引起蛋白變性,能有效地增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,-20度凍存時甘油的濃度可以在20~30%。
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